利用数字PCR 进行无创产前检测21三体
近年来生物科技的进步使得核酸绝对定量成为可能,且各种各样的无创产前诊断和筛查技术层出不穷。其中最具有代表的就是数字PCR (digital PCR,dPCR ) 技术,作为第三代PCR技术,与目前已有的实时PCR技术相比,dPCR是一种能针对靶向核酸分子的高敏感性定量检测手段; 与目前已经运用于无创产前筛查(noninvasive prenatal screening,NIPS) 的高通量测序技术( next-generation sequencing, NGS) 相比,dPCR能缩短检测时间并降低检测费用。因此,探索一种依赖于dPCR技术的高灵敏度且实现实时检测的NIPT方法具有重要意义。 
日前,来自韩国汉阳大学的科研人员收集了976例临床孕妇血浆样本,通过Qx200 Droplet Digital PCR system进行了dPCR技术应用于NIPS的探索,其中52例样本用于NIPS中应用dPCR的研究方案的评估,47例在本研究中用于建立判读21号染色体三倍体(Trisomy 21,T21)结果的临界值(同时增加了7例羊水样本,6例细胞系样本和97例全血样本),其中877例样本用于临床试验验证,统计结果并进行比较分析。
结果显示,检测结果读值随着T21比例的增加而增大,且与理论计算结果预测相符;基于95%置信区间建立的判读T21结果的临界值为1.15,结果读值高于1.15,即T21高危,低于1.15则为T21低危;877例血浆样本中有53例为T21“高风险”,经检测证实有50例为T21,而T21“低风险”的827例样本,经验测证实有824例T21阴性。
该研究具有一定的局限性,首先,该研究中在建立临界值时,虽然涉及样本种类多样,但样本量仍然有限,需进一步增大样本量进行优化;此外,考虑到结果读值在临界值附近的样本,应建立及优化这种基于qPCR技术的灰值区间。
该研究探索并评估了一种基于dPCR技术的NIPT检测方法,该方法能针对样本中不同浓度的非整倍体细胞DNA进行精确定量,且相比于NGS技术,该方法省时、经济,便于推广应用。
                                      ——摘自《医学参考报》